Кожно аллергическая проба микробиология

Кожно аллергическая проба микробиология

При ряде инфекционных заболеваний организм приобретает повышенную чувствительность к аллергенам бактерий их вызывающих. Этот феномен помогает установлению этиологического диагноза. В ряде случаев специфическая бактериальная аллергия формируется рано, в первые дни болезни, что используют в целях ранней диагностики туляремии (внутрикожная аллергическая проба с тулярином становится положительной на 2-й — 3-й день).

В других случаях аллергическая перестройка организма происходит позднее и выявление специфической аллергии может быть использовано в интересах ретроспективного диагноза. Методы гипосенсибилизации организма с помощью соответствующих аллергенов используют для лечения больных некоторыми хроническими формами болезней. Лечебное применение бактериальных аллергенов оправдано в случаях, когда антибактериальная терапия и другие методы лечения не достигают успеха и болезнь приобретает хроническое рецидивирующее течение.

К таким нозологиям в настоящее время можно отнести ряд инфекционных болезней, дающих хронические формы нелегочный туберкулез (поражение сетчатки глаза), бруцеллез (рецидивирующий миокардит), токсоплазмоз (поражения опорно-двигательного аппарата).

Аллергические пробы (накожные и внутрикожные) получили всеобщее признание в диагностике таких бактериальных инфекций, как туляремия, бруцеллез (проба Бюрне), туберкулез (накожная проба Пиркета и внутрикожная проба Манту) токсоплазмоз, грибковые поражения кожи, сап и риккетсиозы (лихорадка Ку). Наиболее проста для выполнения накожная аллергическая проба в сравнении с внутрикожной и другими способами введения аллергена.

Методика внутрикожной аллергической пробы состоит в следующем: на сгибательную поверхность предплечья или на кожу плеча (после обработки 70% спиртом) наносится капля аллергена и через нее производят легкую скарификацию (без появления крови!). Положительная проба (через 24 и 48 ч) при наличии сенсибилизации организма к вводимому аллергену проявляется воспалительной реакцией различной интенсивности: краснота, отек, образование пузырьков, иногда с ощущением местного зуда и жжения.

Степень выраженности реакции и ее продолжительность зависят от состояния сенсибилизации организма и концентрации бактериального аллергена (например при диагностике туберкулеза она не должна быть выше 1:10 000 (!) во избежание очаговых реакций в легких, протекающих с деструкцией (!) легочной ткани).

Диагностика вирусных инфекций

В основе лабораторной диагностики вирусных инфекций лежит обнаружение вируса и антител к нему. Материалом для исследования служат биологические жидкости организма и ткани, где вирус содержится в наибольших количествах. В зависимости от характера и стадии болезни исследуют кровь, спинномозговую жидкость, отделяемое конъюнктивы, уретры, шейки матки, носоглоточную слизь, фекалии, мочу и кусочки тканей органов, полученные с помощью прижизненной биопсии или у трупа.

Для вирусологических исследований материал от больного вводят различным лабораторным животным, в куриные эмбрионы и тканевые культуры; выбор материала и метод исследования определяется тропизмом вируса, присущим различным вирусным инфекциям и его способностью к размножению in vivo и in vitro. Идентификация вируса проводится с помощью специфических методов с применением серологических реакций.

В последние годы для диагностики применяют полимеразно-цепную реакцию (ПЦР), спектр индикации различных вирусов этим методом быстро расширяется. В настоящее время разработана вирусологическая диагностика гепатитов А, В, С, Д, G, TTV; определение вирусов герпеса, цитомегаловирусов, ВИЧ и др. Определяют не только их присутствие в исследуемом материале (кровь и др.), но и количество вирусных частиц (так называемую «вирусную нагрузку» -степень вирусемии и репликацию вируса), что важно не только для диагностики, но и для динамического наблюдения за течением болезни и для оценки эффективности проводимого противовирусного лечения (количество вируса снижается вплоть до его исчезновения).

Наряду с ПЦР сохраняют свое значение некоторые рутинные лабораторные методы диагностики вирусных инфекций: прямая микроскопия мазков-отпечатков из носа для определения ДНК- и РНК-содержащих вирусов; реакция иммунофлюоресценции (РИФ), непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) в диагностике гриппа и других ОРВИ; выделение чистых культур вирусов гриппа для определения их типа.

Широко применяют РСК для определения титра антител у больных в динамике болезни; реакцию торможения гемагглютинации (РТГА), позволяющую определить степень специфического иммунологического ответа организма; применяют также реакции нейтрализации, преципитации в агаре и многие другие специальные вирусологические методы.

Источник

23. Аллергические пробы, их сущности, применение.

Аллергические пробы — биологические реакции для диагностики ряда заболеваний, основанные на повышенной чувствительности организма, вызванной аллергеном.

При многих инфекционных заболеваниях за счет активации кле­точного иммунитета развивается повышенная чувствительность организма к возбудителям и продуктам их жизнедеятельности. На этом основаны аллергические пробы, используемые для диагно­стики бактериальных, вирусных, протозойных инфекций, мико­зов и гельминтозов. Аллергические пробы обладают специфично­стью, но нередко они бывают положительными у переболевших и привитых.

Все аллергические пробы подразделяют на две группы — про­бы in vivo и in vitro.

К первой группе (in vivo) относятся кожные пробы, осуществ­ляемые непосредственно на пациенте и выявляющие аллергию немедленного (через 20 мин) и замедленного (через 24 — 48 ч) типов.

Аллергические пробы in vitro основаны на выявлении сенсиби­лизации вне организма больного. Их применяют тогда, когда по тем или иным причинам нельзя произвести кожные пробы, либо в тех случаях, когда кожные реакции дают неясные результаты.

Для проведения аллергических проб используют аллергены — диагностические препараты, предназначенные для выявления специфической сенсибилизации организма. Инфекционные аллергены, используемые в диагностике инфекционных заболева­ний, представляют собой очищенные фильтраты бульонных куль­тур, реже взвеси убитых микроорганизмов или АГ, выделенные из них.

Кожные пробы. Инфекционные аллергены вводят, как правило, внутрикожно или накожно, путем втирания в скарифицированные участки кожи. При внутрикожном способе в среднюю треть передней поверхно­сти предплечья специальной тонкой иглой вводят 0,1 мл аллерге­на. Через 28 — 48 ч оценивают результаты реакции ГЗТ, определяя на месте введения размеры папулы.

Неинфекционные аллергены (пыльца растений, бытовая пыль, пищевые продукты, лекарственные и химические препараты) вводят в кожу уколом (прик-тест), накожно путем скарификации и втирания или внутрикожной инъекцией разведенного раствора аллергена. В качестве отрицательного контроля используют ИХН, в качестве положительного — раствор гистамина. Результаты учи­тывают в течение 20 мин (ГНТ) по величине папулы (иногда до 20 мм в диаметре), наличию отека и зуда. Внутрикожные пробы ставят в случае отрицательного или сомнительного результата прик-теста. По сравнению с последним, дозу аллергена уменьшают в 100-5000 раз.

Кожные пробы на наличие ГЗТ широко применяют для выяв­ления инфицированности людей микобактериями туберкулеза (проба Манту), возбудителями бруцеллеза (проба Бюрне), лепры (реакция Митсуды), туляремии, сапа, актиномикоза, дерматомикозов, токсоплазмоза, некоторых гельминтозов и др.

Пробы in vitro. Эти методы исследования безопасны для больного, достаточ­но чувствительны, позволяют количественно оценить уровень аллергизации организма.

В настоящее время разработаны тесты для определения сенси­билизации, основанные на реакциях Т- и B-лимфоцитов, ткане­вых базофилов, выявлении общих специфических IgE в сыворот­ке крови и др. К ним относятся реакции торможения миграции лейкоцитов и бласттрансформации лимфоцитов, специфическое розеткообразование, базофильный тест Шелли, реакция дегрануляции тканевых базофилов, а также аллергосорбентные методы (определение специфических IgE в сыворотке крови).

Реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ). РТМЛ ос­нована на подавлении миграции моноцитов и других лейкоцитов под действием медиаторов, вырабатываемых сенсибилизирован­ными лимфоцитами, в присутствии специфического аллергена.

Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТ). В основе этой реакции лежит способность нормальных лимфоцитов перифери­ческой крови вступать в митоз и превращаться в бластные формы при культивировании их in vitro под действием специфических фак­торов — аллергенов и неспецифических стимуляторов митогенеза — митогенов (фитогемагглютинин, конканавалин А, липополисахариды и другие вещества).

Реакция специфического розеткообразования. Розетки — харак­терные образования, возникающие in vitro в результате прилипа­ния эритроцитов к поверхности иммунокомпетентных клеток. Розеткообразование может происходить спонтанно, поскольку Т-лимфоциты человека содержат рецепторы к эритроцитам барана. Спон­танное розеткообразование здоровых людей составляет 52 — 53% и служит показателем функционального состояния Т-лимфоцитов. Этот феномен воспроизводится также и в том случае, если используют эритроциты, на которых фиксированы соответствую­щие аллергены.

Реакция дегрануляции тканевых базофилов. Методика основа­на на том, что под действием аллергена происходит дегрануляция тканевых базофилов крысы, предварительно сенсибилизирован­ных цитофильными AT из сыворотки крови больного.

Базофильный тест Шелли. Известно, что базофильные гранулоциты человека или кролика также дегранулируются в присут­ствии сыворотки больного и аллергена, к которому чувствителен данный пациент.

Определение антител класса IgE in vitro. Лабораторная диагно­стика заболеваний, в основе которых лежит ГНТ, основана на определении аллергенспецифических IgEанти-IgE. При использо­вании радиоактивной метки метод носит на­звание радиоаллергосорбентного теста (PACT), но чаще в каче­стве метки используют фермент или флюоресцирующее вещество (ФАСТ). Время анализа — 6 — 7 часов. Принцип метода: фиксиро­ванный на твердой основе известный аллерген инкубируют с сы­вороткой крови больного; находящиеся в сыворотке специфичес­кие IgEанти-IgE связываются с аллергеном и, таким образом, остаются фиксированными на основе и могут вступать в специ­фическое взаимодействие с добавляемыми мечеными анти-IgE.

Источник



Кожно аллергическая проба микробиология

Патогенное действие тех или иных аллергенов у страдающих аллергией больных проверяется в стационаре и поликлинике элиминационной и нагрузочной (экспозиционная) пробами. Первая из них щадящая, имеет не только диагностическое, тто и лечебное значение, поскольку заключается в прекращении (выключении) воздействия на больного аллергена, подозреваемого по жалобам и анамнезу в развитии аллергии. Положительный результат этой пробы выявляется довольно быстро: наступает улучшение, а затем патологические явления исчезают. Отсутствие заметного улучшения в течение 2—3 дней после элиминации аллергена свидетельствует, что заболевание вызвано не им. При аллергических страданиях глаза эта проба наиболее эффективна в случаях контактной аллергии.

Нагрузочную пробу выполняют с целью дополнительной проверки правильности установления аллергена у данного больного и заключается в том, что в период ремиссии, когда клинических проявлений болезни нет, больного специально подвергают воздействию предполагаемого аллергена. Аллергический ответ подтверждает патогенность исследуемого лекарства или другого вещества для больного. Иногда у детей нагрузочную пробу проводят вскоре после элиминационной, поскольку улучшение в течении болезни может быть обусловлено не исключением аллергена, а другими причинами. Однако нагрузочная проба небезопасна, а результаты ее не всегда достоверны.

Кожные пробы, или тестирование. Основанные на специфическом взаимодействии аллергенов с фиксированными и коже антителами-реагенами кожные пробы (тесты) получили широкое распространение в офтальмологии. Их популярности способствуют простота выполнения, атравматичность, относительная безопасность при правильном выполнении и высокая специфичность ответов на испытываемые аллергены. В отличие от других кожные пробы позволяют проводить более активный поиск вызвавшего болезнь аллергена, так как дают возможность одновременно определить несколько аллергенов, хотя аллергологи предостерегают от исследования сразу двух и более медикаментов [Адо А. Д. и др., 1976].

Оценка кожных проб в аллергологии неодозначна: положительному мнению большинства противостоит отрицание их диагностической ценности некоторыми исследователями. Офтальмологи считают эти пробы важными для этиологической диагностики аллергических и инфекционно-аллергических глазных болезней (Н. И. Шпак, Р. И. Шатилова, Н. С. Зайцева, К. Velhagen и др.). Проведению проб всегда должны предшествовать тщательный аллергологический анамнез, офтальмологическое и общее клиническое обследование больного. Желательно, чтобы у офтальмологических, как и у других, больных их выполнял врач-аллерголог. При развившемся патологическом процессе, когда его симптомы наиболее выражены, кожные пробы не показаны.

Для постановки проб применяют слабые растворы исследуемых веществ. Поскольку концентрация глазных лекарственных средств, назначаемых местно, обычно певысока, их можно проверять без дополнительного разведения. Исключение составляют антибиотики. При высокой сенсибилизации апробируют растворы пенициллина, тетрациклина, стрептомицина, содержащие от 0,5 до 100 ЕД в 1 мл, у больных со слабыми проявлениями аллергии — от 1000 до 10 000—50000 ЕД в 1 мл. Жидкие лекарственные и другие вещества исследуют с помощью капельной и скарификационной проб, а при их отрицательных ответах прибегают к аппликационным и внутрикожным пробам [Адо А. Д. и др., 1976].

Любую из указанных проб выполняют на коже ладонной поверхности предплечья, спины, живота, на которой зоны проб очерчивают карандашом. При капельной (эпикутанной) пробе в центр круга наносят каплю апробируемого раствора, рядом, на расстоянии 3—4 см, или на другой руке — каплю растворителя для контроля. При положительной пробе через 24—72 ч в этом месте появляются эритема, отек, папулы и везикулы.

Источник

Кожно аллергическая проба микробиология

Основной метод in vivo-диагностики аллергических заболеваний — кожные пробы с аллергенами. В коже больного присутствуют тучные клетки, высокоаффинные рецепторы которых прочно связаны со специфичными к аллергену IgE-антителами. Внутрикожное введение небольшого количества аллергена, к которому сенсибилизированы больные, приводит к его перекрестному связыванию с аллергенспецифическими антителами на поверхности тучных клеток и активации последних.

Активированные тучные клетки выделяют множество предсуществующих и заново синтезируемых медиаторов, действующих на окружающие ткани. Наибольшую роль среди медиаторов, вызывающих немедленную реакцию кожи, играет гистамин. На месте введения аллергена появляется участок гиперемии с волдырем в центре. Эта реакция развивается быстро, достигает максимума примерно через 20 мин, а еще через 20—30 мин исчезает. Однако у некоторых больных через 6-12 ч вновь возникает менее отграниченный отек на гиперемированном участке кожи.

Эта поздняя реакция обычно исчезает через сутки. В биоптатах в местах поздней реакции обнаруживается воспалительный инфильтрат, содержащий Т-лимфоциты, нейтрофилы и эозинофилы. Аналогичная поздняя реакция, по-видимому, развивается после воздействия аллергена и в других органах (слизистой оболочки полости носа, легких).

У детей первую кожную пробу проводят с помощью скарификационной методики. Через нанесенную на кожу каплю аллергена тонкой иглой слегка царапают или покалывают кожу, что обеспечивает проникновение небольшого количества аллергена в эпидермис. При отрицательном результате такой пробы, но подозрительном анамнезе можно провести внутрикожную пробу. Иглой 26-го диаметра в кожу предплечья вводят 0,01-0,02 мл разведенного экстракта аллергена. Эта методика более чувствительна и позволяет использовать в 100-1000 раз меньшую концентрацию аллергена.

Проводить внутрикожную пробу с пищевыми аллергенами не рекомендуется, так как это может вызвать анафилактический шок. При высокой концентрации экстракта (1:100) вместо аллергической реакции можно получить простое раздражение. Хотя скарификационная проба менее чувствительна, ее результаты лучше согласуются с симптомами естественного воздействия аллергена.

Помимо обычных домашних аллергенов часто используют набор аллергенов, характерных для данного географического региона. Однако число кожных проб следует ограничивать теми аллергенами, на которые указывает анамнез. Положительные и отрицательные результаты проб необходимо контролировать пробами с гистамином и физиологическим раствором. Проба с физиологическим раствором (отрицательный контроль) позволяет убедиться, что у больного отсутствует уртикарныи дермографизм и что реакция не вызвана простым давлением на чересчур чувствительную кожу.

Проба же с гистамином (положительный контроль) должна доказать чувствительность кожи к гистамину. Антигистаминные и адренергические средства (эфедрин и адреналин) подавляют кожные аллергические реакции, и их следует отменять за определенный срок до проведения проб. Длительный прием кортикостероидов также может снижать реактивность кожи, так как при этом в ткани уменьшается количество тучных клеток и выделение ими медиаторов воспаления.

В ряде случаев в клинике используют провокационные пробы с целью выявления связи между воздействием аллергена и развитием симптомов заболевания, воздействуя аллергенами на кожу, конъюнктиву, слизистую оболочки полости носа или рта, ЖКТ или легкие. Реактивность бронхов проверяют, заставляя больного вдыхать экстракты аллергена в возрастающих концентрациях и следя за обструкцией дыхательных путей по клиническим признакам или по показателям легочной функции. Согласно большинству исследований, результаты такой пробы соответствуют данным, получаемым с помощью кожных проб и/или тестов in vitro.

Риск тяжелого бронхоспазма, большие затраты времени, экономические соображения и необходимость присутствия опытного персонала ограничивают проведение провокационных проб научно-исследовательскими целями.

В настоящее время для оценки реактивности бронхов чаще всего используют провокационную пробу с метахолином, который вызывает резкое сужение бронхов у больных бронхиальной астмой, но не у здоровых людей. После исходной спирометрии начинают ингаляцию метахолина в возрастающих концентрациях, пока ОФВ, не упадет на 20%.

Пробы на пищевую аллергию проводят, чтобы выявить конкретные продукты, вызывающие симптомы заболевания, если они присутствуют в диете больного. Используют те пищевые продукты, которые вызывают подозрение при опросе или по результатам кожных проб и/или тестов in vitro. Пробы на пищевую аллергию можно проводить открытым, слепым, двойным слепым или двойным слепым и плацебо-контролируемым методом с постепенным (через определенные интервалы) увеличением количества подозреваемого продукта дo возникновения симптомов или до полного насыщения.

Из-за риска тяжелых осложнений такие пробы следует проводить лишь при наличии специального оборудования (в том числе для сердечно-легочной реанимации) и опытного персонала, умеющего справляться с анафилактическими реакциями.

Источник